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Olis光谱仪 CPL圆偏振荧光光谱仪 圆二色光谱仪 应用领域分析

发布时间:2022-05-10   点击次数:32次

美国Olis光谱仪 CPL圆偏振荧光光谱仪 CD圆二色光谱仪 应用领域分析

 

蛋白质二级结构

在研究蛋白质折叠,蛋白质稳定性或酶活性时,蛋白质二级结构是重要的考虑因素。

用于监视二级结构的强大工具是圆二色性(CD),它是左右圆偏振光的吸收差。由于蛋白质由手性氨基酸组成,因此它们具有CD活性,并显示出对CD的二级结构敏感的独特CD光谱。该光谱可以提供蛋白质结构的定性快照,或者可以使用多种算法从远紫外CD光谱估算蛋白质的二级结构组成,其中一些算法可在Olis GlobalWorks软件中获得。

蛋白质二级结构也可用于监测蛋白质折叠和解折叠。平衡研究包括随温度或化学变性剂增加而变化的CD光谱集合。随着蛋白质的展开,CD光谱反映了这一点。在此变性过程中以单个波长或全光谱扫描拟合数据可提供热力学信息,例如熔融温度和展开焓。这两个参数都提供了有关所研究蛋白质稳定性的重要信息。

在DSM 17, DSM 20,DSM 1000,和多扫描支持蛋白质二级结构研究。CD 250 Peltier电池座等附件为进行这些实验提供了一种便捷的方法。

停止流

蛋白质折叠和展开的动力学可以通过使用停止流附件进行监测。可以通过在停止流动反应过程中观察信息波长的CD信号来研究蛋白质结构的毫秒变化。GlobalWorks还支持对这些动力学轨迹进行动力学分析。

酶学

酶催化的机制对生物化学领域的许多研究人员而言很重要。酶活性测量的常用方法包括监测酶和底物溶液随时间变化的吸光度或荧光。随着反应的进行,吸光度或荧光的变化报告了产物浓度的增加。

稳态动力学

稳态动力学测量涉及在整个测量过程中监测酶/底物复合物在恒定浓度下表现出的吸光度或荧光变化。几种Olis仪器支持稳态动力学的测量。这些包括诸如HPDA 8452,Cary 14,Cary 17, DW2,DW2000,DB620和RSM 1000的吸收模型,以及诸如DM 45和DM 245的荧光模型。

稳态前动力学

稳态前动力学涉及测量酶/底物复合物的形成。可以将停止流量附件添加到大多数此类仪器中。其他配件包括TLC 50,四格珀耳帖(Peltier)炮塔和自动酶测定仪。Olis CLARiTY室为在高散射环境(例如全细胞或线粒体悬浮液中)中测量酶动力学提供了令人兴奋的新可能性。

DNA结构/构象

DNA的结构和构象是研究DNA与蛋白质和其他DNA配体相互作用的重要考虑因素。确定DNA结构和构象的技术包括X射线晶体学,圆二色性(CD),荧光和紫外可见吸收光谱。除X射线晶体学外,所有这些技术均由Olis仪器提供支持。

圆二色性

DNA在200-250 nm区域表现出独特的CD光谱,该光谱对DNA结构特别敏感。当添加扰动剂(例如温度升高或DNA配体)时,CD光谱可用于探测DNA结构。典型的实验包括在温度升高或将配体添加到样品中的同时收集光谱。

所有Olis CD型号DSM 17,DSM 20,DSM 1000和Protein Machine都支持DNA的CD测量,并且包括诸如CD 250 Peltier温控细胞架,用于配体结合的自动滴定仪和用于动力学研究的Stopped-Flow等附件。

荧光性

无论是直接来自DNA分子还是来自外部探针,荧光都是阐明DNA结构信息的有价值的技术。发射最大值和荧光强度变化揭示了有关DNA结构完整性的信息。结合荧光探针在结合DNA后显示出极大的荧光强度增强,并且也是有用的DNA结构探针。荧光能量转移(FRET),其中两个具有重叠发射和激发光谱的探针连接到同一DNA分子。从供体染料转移到受体染料的能量是两者之间距离的函数。因此,FRET探针可以成为监测适当标记的DNA分子经历的结构变化的有价值的工具。所有Olis Fluorescence型号DM 45,DM 245,SLM 8000,SPF-500,RSM 1000F和Cary荧光系统的理想配置是支持DNA的荧光研究。DSM 17,DSM 20和DSM 1000也可以配置用于CD和荧光研究。

荧光各向异性

荧光各向异性是荧光探针迁移率的量度,也可用于观察DNA结构和构象。在该技术中,荧光探针被垂直偏振光激发,发射的偏振量与荧光寿命期间荧光探针的迁移率有关。快速移动的探针将完全去极化(各向异性为零),而较慢的探针(例如与DNA结合的探针)将保持部分极化(非零各向异性)。Olis Polarization Toolbox附件为任何Olis荧光计(SLM系列除外)增加了各向异性功能。其他有用的附件包括TLC 50 Peltier池架,4池Peltier炮塔,自动滴定仪和Stopped-Flow。

紫外线吸收

DNA的紫外吸收光谱也揭示了有关DNA结构的重要信息。尽管由于结构差异而引起的变化通常很小,但是GlobalWorks中的Olis拟合算法甚至可以消除最小的光谱变化。该RSM 1000, OLIS 14/17和HPDA 8452支持的紫外-可见吸收光谱的集合到探针DNA结构。有用的附件包括TLC 40珀耳帖电池固定器和停止流。

线粒体代谢

光谱学的缺点之一,特别是影响吸收率的是光散射对测量的影响。高度散射的样品将增加市场上绝大多数分光光度计的表观吸收率。仪器无法区分散射光和吸收光。实际上,该伪影通常用于通过测量600 nm的表观吸光度来大致定量细菌细胞培养物。

浑浊样品

在1980年代,随着Aminco DW2和后来的DW2000的推出,部分解决了这个问题。Olis仍然支持这些惊人的光学平台。但是,Olis现在通过CLARiTY系列仪器在该设计上居于**地位,该仪器具有在存在高散射介质的情况下记录真实吸收光谱的能力。Olis CLARiTY系列仪器非常适合监测线粒体悬浮液,整个细胞或其他高度散射环境中的吸光度变化。

CLARiTY系列产品包括RSM 1000,DM 245和DB 620光学平台。RSM 1000配置允许收集快速扫描,通常配置为每秒最多测量100次扫描。DM 245和DB 620配置为随时间进行单个波长测量或用于常规吸光度扫描。CLARiTY室包括磁力搅拌和25至80 C temperature的温度控制。常用附件包括TLC 50(用于RSM 1000),StepDisk(用于RSM 1000),Twin Peltier(用于DW2 / 2000)和荧光模块(用于DW2 / 2000)。

化学动力学

反应动力学是实验室和教室化学研究的重要组成部分。动力学分析的概念是许多本科化学课程的基础,也是许多研究项目的基础。Olis支持通过光谱学在紫外线,可见光或近红外光谱区域内以微秒到小时的时间范围监视反应。动力学反应可以通过多种方法触发,包括手动混合,停止流混合或快速光解。但是,可以由TTL信号启动的任何触发器都可以集成到Olis系统中。

吸光度和荧光

强大的Olis动力学系统是RSM 1000,可以轻松配置以用于从深紫外到近红外的任何波长范围。其获得的ScanDisk技术支持每秒最多收集1000次光谱扫描。为了以更适中的速率吸收光谱,HPDA 8452以高达10次扫描/秒的速度收集光谱扫描。RSM 1000,DB 620或HPDA 8452可用于单波长动态波长。

的DM 45,DM 245,RSM 1000F,和SLM系列荧光计提供的能力来监控荧光反应为好。

停流,闪光灯,LED,Peltier TLC 45,Peltier TLC 50和电磁搅拌器是这些测量的常用附件。

 

 

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